摘要:

摘要:目的：系统评价射频消融（radiofrequency ablation，RFA）联合经肝动脉化疗栓塞（transcatheter arterial chemoemboliza－tion，TACE）治疗肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的有效性与安全性。方法：计算机检索PubMed、Cochrane Li－brary、EMBase及CNKI数据库中1978至2013年间的数据，只纳入比较RFA+TACE与单独RFA治疗HCC的随机对照试验。结果：按照入选标准，有9 项临床试验纳入本研究。与单独RFA治疗HCC相比，RFA TACE能显著提高患者1、3、5年总生存期（OR1年=2.34，95%CI＝1.54～3.57，P＝0.000；OR3年=1.99，95%CI＝1.43～2.77，P＝0.000；OR5年=2.26，95%CI＝1.03～4.95，P=0.04）和1、3年无肿瘤复发生存期（OR1年=1.74，95%CI＝1.16～2.63，P=0.008；OR3年=2.47，95%CI＝1.61～3.80，P＝0.000）。２组之间主要并发症发生率无明显差别（OR=1.24，95%CI＝0.79～1.95，P=0.36）。亚组分析显示：RFA TACE治疗能明显提高直径在3～5 cm之间的HCC患者的1、3年总生存期。结论：RFA TACE能显著延长HCC患者的无肿瘤复发生存期及总生存期，尤其适合于直径介于3～5 cm之间的HCC患者。

摘要:目的：以ob/ob基因敲除肥胖小鼠为研究模型，探讨肥胖对小鼠肝脏炎症的影响以及ob/ob小鼠肝脏中与能量代谢相关转录因子：过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（peroxisome proliferator activated receptor γ coactivator-1α，PGC-1α）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator activated receptor α，PPARα）、核呼吸因子1（nuclear respiratory factor 1，NRF1）的基因表达特征。方法：选取以C57BL/6J为背景的雄性ob/ob肥胖小鼠（以下简称ob/ob小鼠）作为肥胖模型，同龄正常C57BL/6J雄性小鼠作为对照，2组小鼠各8只，于SPF级动物房饲养至5月龄，处死后取肝组织，石蜡包埋切片，HE染色观察组织形态；抗原F4/80免疫组化染色观察巨噬细胞浸润情况；RT-PCR检测各转录因子mRNA表达水平。结果：5月龄ob/ob小鼠体质量和肝脏质量高于对照组（t=9.66，P=0.000；t=9.98，P=0.000）；石蜡切片HE染色结果显示ob/ob小鼠肝细胞胞浆内出现空泡状脂肪滴；F4/80免疫组化结果显示ob/ob小鼠肝脏组织巨噬细胞浸润明显；RT-PCR结果显示ob/ob小鼠肝脏组织转录因子PGC-1α、PPARα、NRF1的mRNA表达水平较对照组明显上调（t=3.02，P=0.009；t=5.64，P=0.000；t=2.93，P=0.011）。结论：ob/ob小鼠表现出显著的肥胖特征，肝细胞出现明显脂质沉积，肝组织炎性细胞浸润；上述改变可能与肝脏能量代谢相关转录因子PGC-1α，PPARα和NRF1的表达增加有关。

摘要:目的：研究基质金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMP）1和2的siRNA对CCl4诱导的肝纤维化大鼠Smad7蛋白表达的影响。方法：采用前期构建的TIMP-1 siRNA、TIMP-2 siRNA治疗肝纤维化大鼠的肝脏组织作为研究对象，分为正常组、模型组、阴性对照组（0.25 mg/kg非特异性靶序列）、TIMP-1 siRNA 0. 25 mg/kg组和TIMP-2 siRNA 0.25 mg/kg组。Real-time PCR法检测Smad7的mRNA表达；免疫组织化学、Western blot检测Smad7的蛋白表达。结果：Real-time PCR结果显示TIMP-1 siRNA 0.25 mg/kg组（59.7±3.3）%、TIMP-2 siRNA 0.25 mg/kg组（60.2±3.4）% Smad7的mRNA表达量均较模型组（28.0±1.6）%、阴性对照组（28.6±1.7）%明显增加（P=0.000）；免疫组织化学结果显示TIMP-1 siRNA 0.25mg/kg组（8.55±0.67）、TIMP-2 siRNA 0.25 mg/kg组（8.23±0.85）Smad7的蛋白表达量均较模型组（4.25±0.53）、阴性对照组（4.19±0.55）明显增加（P=0.000）。Western blot结果显示TIMP-1 siRNA 0.25 mg/kg组（0.706±0.039）、TIMP-2 siRNA 0.25 mg/kg组（0.698±0.038）Smad7的蛋白表达量均较模型组（0.278±0.013）、阴性对照组（0.285±0.014）明显增加（P=0.000）。结论：TIMP-1 siRNA、TIMP-2 siRNA对于肝纤维化Smad7的表达有促进作用。

摘要:目的：研究乙肝病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein，HBX）对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用。方法：HBX腺病毒表达载体（Ad-HBX-GFP）感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞，Si-HBX分子（Si-HBX oligo）用 LipofectamineTM 2000转染入HepG2.2.15细胞，用RT-PCR和Western blot法检测HBX与Gankyrin的表达情况；β-catenin腺病毒载体转染HepG2、SMMC-7721细胞，用Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况；在沉默β-catenin表达的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因，Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况。结果：①HepG2.2.15细胞中Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于HepG2细胞（P＜0.05）。②HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad-HBX-GFP组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于绿色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-GFP）组（P＜0.01）。③HepG2.2.15细胞中Si-HBX组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均低于Si-阴性对照（Si-NC）组（P＜0.01）。④在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达HBX后，Ad-HBX-GFP组β-catenin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑤在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后，β-catenin腺病毒表达载体（Ad-β-catenin-GFP）组Gankyrin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑥在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后，过表达HBX基因，Si-β-catenin腺病毒表达载体（Ad-si-β-catenin-RFP）组与红色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-RFP）组相比，Gankyrin的蛋白表达水平未见升高（P＜0.01）。结论：HBX-Wnt/β-catenin-Gankyrin信号转导通路存在与肝癌细胞中，抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用，本结果将可能为肝癌的治疗提供新的思路。

摘要:目的：设计人工锌指蛋白（zinc finger protein，ZFP）特异性结合于乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein，HBX）基因启动子，观察ZFP在体外对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）转录的抑制。方法：将pcDNA3.1-ZFP转染入HepG2.2.15细胞24 h后，用Western blot检测HBX蛋白的含量；用ELISA和real-time PCR检测上清液中乙型肝炎核心相关抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）和HBV DNA含量，用RT-PCR检测胞内HBV mRNA水平。结果：ZFP可抑制HepG2.2.15细胞中HBX的表达；相比空质粒组，ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA 拷贝量和HBeAg 含量分别下降了51.7%（t=23.079，P=0.000，９５％CI=44.98%～58.52%）、33.8%（t=3.887，P=0.003，９５％CI=12.12%～55.48%）；细胞内HBV mRNA也明显减少（t=3.616，P=0.022）。结论：人工设计的可特异性结合于HBX的ZFP可于HepG2.2.15细胞中有效抑制HBV转录。

摘要:目的：研究CD133+细胞的干性鉴定和131I-CD133抗体在体内外对人肝癌CD133 -HepG2干细胞的抑制作用。方法：氯胺T法制备并鉴定131I-CD133抗体；免疫磁珠（magnetic-activated cell sorting，MACS）分选CD133 -HepG2细胞；流式细胞仪（flow cytometry，FCM）检测分选前后CD133表达率；体外克隆形成实验、成球实验和体内成瘤实验验证其干细胞特性；将分选出的CD133 细胞分组为CD133抗体、131I、131I-CD133抗体和131I CD133抗体 4个组，MTT法检测不同处理后不同组中CD133 细胞生长抑制率；成功构建人肝癌CD133 -HepG2移植瘤模型；随机分4组，1次/2 d给予尾静脉用药，共14次。4周后，处死小鼠，比较肿瘤的体积、质量、计算抑瘤率；HE染色观察肿瘤组织病理学改变。结果：131I-CD133抗体标记率为89.34%，放化纯度为98.21%。流式显示分选前后CD133表达率分别为（1.78±0.54）%和（98.46±0.97）%。成球实验、克隆形成实验和裸鼠成瘤实验显现CD133 细胞相对于CD133-细胞更具有干细胞特性。131I-CD133抗体治疗组体外对细胞抑制率及体内抑瘤率明显高于其余各实验组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：131I-CD133抗体在体内外均能有效抑制人肝癌CD133 -HepG2细胞的生长。

摘要:目的：研究SIRT1抑制剂sirtinol、曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）复制的影响，并探讨组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）在HBV复制过程中的作用。方法：运用MTS分析HepG2.2.15细胞对sirtinol、TSA的耐受程度；real-time PCR和Southern blot验证sirtinol和TSA对HepG2.2.15细胞中HBV复制中间体表达的影响；Western blot和ELISA分析sirtinol对HBV核心蛋白（HBc）和HBsAg、HBeAg表达的影响。结果：sirtinol能抑制HBV复制中间体、HBc的表达和HBsAg、HBeAg的分泌，TSA可以促进HBV的复制。结论：SIRT1抑制剂sirtinol具有抗病毒作用。

摘要:目的：建立一种肽核酸（peptide nucleic acid，PNA） 反向杂交技术，用于检测乙肝病毒阿德福韦酯（adefovir dipivoxil，ADV）常见耐药突变位点。方法：利用反向杂交技术，设计出特异性的PNA探针，与PCR扩增后带有生物素标记的样本进行杂交；通过对探针浓度，杂交温度和时间等条件的优化建立起最佳反应条件。应用该技术检测了临床ADV治疗慢性乙肝患者的72例血清样本，与测序法比较了其检测的准确性。结果：（1）通过共价结合能够将PNA探针固定在尼龙膜上，特异性检测ADV常见耐药突变位点。（2）与直接测序法相比，PNA反向杂交技术检测准确性为97.88％。结论：通过优化杂交反应，建立起快速、灵敏的检测乙肝病毒ADV常见耐药突变位点的PNA反向杂交技术。

摘要:目的：构建乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）重组腺病毒，为HBV的相关研究提供一种高效率、便捷的实验手段。方法：将HBV1.3倍体的片段构建到pAdTrack-TO4穿梭载体上，再经限制性核酸内切酶PmeⅠ线性化后转入含有腺病毒骨架载体pAd-Easy1的BJ5183感受态中进行重组并鉴定。鉴定正确后的重组腺病毒质粒经PacⅠ线性化后转染入HEK-293细胞进行病毒包装，获取HBV1.3倍体的重组腺病毒（Ad-HBV1.3）。通过荧光显微镜进行感染效率的检测；用ELISA、Western blot方法在蛋白水平检测HBV蛋白表达情况；小鼠尾静脉注射HBV1.3倍体的重组腺病毒，检测经腺病毒感染后的小鼠体内HBV表达情况。结果：在Ad-HBV1.3腺病毒感染后，细胞的感染效率可达到95%以上；ELISA实验检测实验组乙型肝炎s蛋白（hepatitis B virus S protein，HBs）、乙型肝炎e蛋白（hepatitis B virus E protein，HBe）表达量明显高于对照组；Western blot结果显示感染Ad-HBV1.3腺病毒后可有高水平的HBs表达；动物实验显示小鼠在注射Ad-HBV1.3腺病毒后体内HBs在第3天即可开始表达，5 d达到峰值，7 d后逐渐下降。结论：本研究成功构建了可表达HBV的重组腺病毒，其感染效率可高达95%，为HBV相关研究提供一种简单高效的研究手段。

摘要:目的：探讨汉族人群中白介素-16（interleukin-16，IL-16）基因单核苷酸多态性与膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis，KOA）的相关性。方法：采用“病例-对照”研究方法，纳入150例汉族KOA患者与147例非KOA受试者，其年龄、性别、体质指数相匹配。采用苯酚氯仿法提取外周血白细胞基因组DNA，聚合酶链反应限制性片段长度多态性的方法检测IL-16基因rs11556218、rs4072111和rs4778889 ３个位点与KOA的遗传易感相关性，并用基因测序验证结果。结果：病例组和对照组中3个位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。KOA组rs11556218的T/G基因型频率高于非KOA的人群（OR=2.06，95%CI=1.26～3.35，P=0.005），G/G也明显增加发病风险（OR=2.52，95%CI=1.10～5.74，P=0.005），rs4072111的C/T基因型KOA的发病风险较C/C基因型明显增加（OR=2.45，95%CI=1.42～4.22，P=0.000），T/T也明显增加发病风险（OR=4.04，95%CI=1.06～15.37，P=0.000）；rs11556218与rs4778889存在连锁不平衡关系（D’=0.63，R2=0.236），单倍型TTT增加KOA的发病风险（OR=3.70，95% CI=1.57～8.72，P=0.003），GCC也增加了KOA的发病风险（OR=6.22，95%CI=2.37～16.33，P=0.000）。结论：汉族人群中IL-16基因多态性可能与KOA易感性有关。

摘要:目的：构建肝再生增强因子（augmenter of liver regeneration，ALR）基因RNA干扰（RNA interference，RNAi）慢病毒载体，并检测其对人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因表达的干扰效率。方法：针对ALR基因RNAi的有效靶序列，合成靶序列的OligoDNA，退火形成双链DNA，与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切线性化的GV118慢病毒载体连接产生LV-ALR-shRNA重组慢病毒载体，经转化感受态细胞后筛选出阳性克隆，并进行测序鉴定。用293T细胞包装产生慢病毒，逐孔稀释法测定病毒滴度。再将包装浓缩后的慢病毒转染人肝癌细胞株HepG2和QGY，应用Real-time PCR和Western blot方法检测HepG2和QGY细胞中ALR基因mRNA和蛋白的表达情况。结果：酶切鉴定证实成功构建了针对人ALR基因的RNAi慢病毒载体，包装并浓缩慢病毒，病毒滴度为 8E+8TU/ml。将病毒感染人肝癌细胞株HepG2和QGY后，2种细胞的干扰组ALR的mRNA表达水平较阴性对照组及空白对照组均明显下降（HepG2细胞，P干扰组vs. 阴性病毒对照组=0.004，P干扰组vs. 空白对照组=0.001；QGY细胞，P干扰组vs. 阴性病毒对照组=0.005，P干扰组vs. 空白对照组=0.001），同样，干扰组ALR在蛋白水平的表达也明显减降低。结论：成功构建ALR基因RNAi慢病毒载体，该载体能有效干扰人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因的表达。

摘要:目的：探讨钙中性蛋白酶2（calpain2）及其抑制剂calpastatin在肝纤维化过程中的表达变化及他们在肝细胞凋亡中的作用。方法：雄性Wistar大鼠40只，随机分为正常组4、8周组和肝纤维化4、8周组，每组各10只。肝纤维化组按0.3 ml/100 g体质量皮下注射40% CCl4植物油溶液，每隔3 d注射１次，造模时间分别为4周和8周；正常组大鼠皮下注射等量植物油溶液。采用原位末端转移酶标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL）法检测肝组织中肝细胞凋亡的情况；免疫组织化学法及Western blot检测肝组织中calpain2、calpastatin及活性caspase3的表达情况；real-time PCR检测肝组织中calpain2及calpastatin mRNA的表达变化。结果：免疫组化及Western blot检测显示肝纤维化4周组大鼠肝组织中calpain2及calpastatin蛋白的表达与正常4周组比较差异无统计学意义（P >0.05）；随着肝纤维化程度的加重，肝纤维化8周时大鼠肝组织中calpain2的表达明显增加，而calpastatin的表达明显减少；real-time PCR检测发现肝纤维化4、8周组大鼠肝组织中calpain2 mRNA表达较相应的正常对照组明显增加（P＜0.01），而calpastatin mRNA的表达在肝纤维化8周组明显减少（P＜0.01）；此外，通过免疫组化及Western blot发现肝组织中活性caspase3的表达在肝纤维化4周时已明显增加，肝纤维化8周时达高峰；同时TUNEL法检测发现肝纤维化大鼠肝组织中肝细胞凋亡的数目较正常组大鼠显著增加（P＜0.01）。结论：calpain2与calpastatin在蛋白及基因水平的表达变化，提示他们可能参与了肝纤维化的发生发展过程，其致肝纤维化的机制可能与促进肝细胞的凋亡有关。

摘要:目的：观察姜黄素对肥胖SD大鼠体质量、血糖、血脂、葡萄糖耐量和脂肪组织炎症因子巨噬细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）表达和分泌的影响。方法：将雄性SD大鼠分别用对照饲料（control diet，CD）和高脂饲料（high fat diet，HFD）喂养9周，HFD组每天给予低、中和高剂量姜黄素（10、30、100 mg/kg），共计3周。观察姜黄素对葡萄糖耐量、体质量和血清生化参数的影响。采用实时荧光定量PCR检测脂肪组织MCP-1及TNF-α mRNA的表达。结果：高剂量的姜黄素能明显改善HFD诱发的糖耐量受损（GTT实验15 min和30 min血糖，HFD对照组分别为：（19.4±1.7） mmol/L和（16.2±1.3） mmol/L；HFD高剂量姜黄素组分别为：（13.8±1.4） mmol/L和（12.1±0.9） mmol/L；P均小于0.05。中和高剂量姜黄素处理能降低HFD动物的体质量（F=13.219，P<0.001），3个剂量组姜黄素均能降低脂肪组织MCP-1（F=7.024，P=0.001）和TNF-α mRNA（F=5.537，P=0.004）表达，血脂成分和血糖有不同程度的改善，改善程度与使用的剂量有关。结论：姜黄素能降低肥胖SD大鼠脂肪组织MCP-1和TNF-α的基因表达，从而降低脂肪组织炎症因子的产生，可能是姜黄素改善高脂饮食诱发的代谢紊乱的作用机理之一，且高和中剂量组的改善作用优于低剂量组。

摘要:目的：探讨炎症促进四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）所致的小鼠单纯性脂肪变性进一步脂肪集聚的分子机制。方法：12只6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组（n=6）和炎症组（n=6）。2组均CCl4皮下注射2周后，再分别给予皮下注射生理盐水或酪蛋白16周，18周后处死小鼠，收集血清及肝组织标本，称量小鼠体质量及肝质量计算肝指数评估肝脏受损情况，ELISA法检测血清炎症因子白介素-6（interleukin-6，IL-6），使用化学酶促比色法检测小鼠肝组织的脂质水平，油红O染色观察小鼠肝组织的脂质集聚情况，real-time PCR检测小鼠固醇调节元件结合蛋白1（sterol regulatory element binding proteins-1，SREBP-1）和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase，HMGCR）的基因表达水平，Western blot检测SREBP-1和HMGCR的蛋白表达水平。结果：炎症组IL-6的表达比对照组明显升高（t=8.434，P=0.000）。与对照组相比，炎症组的SREBP-1 和HMGCR基因的表达明显上调（t=10.612，P=0.000；t=12.749，P=0.000），Western blot显示SREBP-1和 HMGCR的蛋白表达趋势与基因一致。肝脏脂质检测显示炎症组比对照组的肝脏脂质明显升高（t=6.148，P=0.000；t=7.288，P=0.000）。肝指数提示与对照组相比，炎症组的肝指数明显升高（t=8.452，P=0.000），油红O染色显示炎症组的脂质集聚明显高于对照组。结论：炎症因子可能通过促进SREBP-1-HMGCR表达使CCl4所致的小鼠脂肪变性肝细胞胆固醇内源性合成增加，加重肝脏脂质的异常集聚。

摘要:目的：克隆沙雷氏菌CQMUS2中铬还原酶T（Chromate reductase T，ChrT）的全基因，构建其原核表达载体并转化至大肠杆菌中表达蛋白，分析表达产物的活性。方法：应用PCR技术，以耐铬沙雷氏菌CQMUS2基因组DNA为模板扩增ChrT全基因，将该基因连接至表达载体pET-28a（+）并转化进大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21（DE3）表达，用酶促反应鉴定重组ChrT酶的活性和Cr（Ⅵ）还原能力，探索其最适pH和温度。结果：克隆出的ChrT全基因长为567 bp，编码188个氨基酸，分子量约20 kD；IPTG诱导10 h后，在大肠杆菌中成功表达了目的蛋白，其碱基序列和分子量与ChrT酶一致；纯化后，ChrT酶能还原酶促反应体系中的Cr（Ⅵ），使实验组Cr（Ⅵ）含量明显低于对照组（P＝0.000），其酶活可达997 U/L；ChrT酶的最适pH为6.5~7.5，最适温度为37 ℃。结论：ChrT酶具有Cr（Ⅵ） 还原活性，为进一步研究高效除铬基因工程菌奠定了基础。

摘要:目的：分析变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）豚鼠模型鼻腔灌洗液白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）、白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）及鼻相关淋巴组织中白细胞介素-23（interleukin-23，IL-23）mRNA的表达水平，探讨该模型中是否存在Th2/Th17细胞因子失衡。方法：建立AR豚鼠模型，收集鼻腔灌洗液，采用ELISA法检测灌洗液中IL-17和IL-4，分离鼻相关淋巴组织，通过RT-PCR半定量检测IL-23 mRNA的表达水平，比较模型组和对照组间细胞因子水平差异。结果：AR模型组鼻腔灌洗液IL-17水平为[（4.98±1.54） pg/ml]，比对照组[（12.68±3.32） pg/ml]低，差异有统计学意义（t=10.35，P=0.006）。鼻相关淋巴组织中IL-23 mRNA的表达水平与IL-17的表达相似；而鼻腔灌洗液中IL-4的表达水平正好相反，与对照组 [（6.60±1.36） pg/ml]比较，模型组IL-4的表达水平[（31.20±4.25） pg/ml]高，差异有统计学意义（t=17.26，P=0.001）。结论：Th17相关的细胞因子IL-17、IL-23在AR动物模型中表达降低，而Th2细胞因子IL-4的表达水平明显升高，从而推测在AR中可能存在Th2/Th17细胞因子网络失衡，这种Th2/Th17细胞因子网络失衡可能对变应性炎症的发生起到关键的重要。

摘要:目的：探讨肝细胞性肝癌（hepatic carcinoma，HCC），以下简称肝癌，患者发生门静脉癌栓（portal vein tumor thrombus，PVTT）的高危因素。方法：通过回顾性分析随机抽取的本科室2009年4月至2011年4月收治的HCC患者126例。分析 PVTT形成高危因素，包括甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）值（以400 ng/ml为界）、有无 PVTT、HBsAg、肿瘤直径、肿瘤数目、细胞分化程度（Edmondson-Steiner分级法）、有无脉管浸润以及性别。用卡方检验及非条件logistic回归分析。结果：126例为HCC，56例（44.4%）确诊为HCC合并PVTT。脉管浸润、肿瘤直径、高滴度AFP、肿瘤数目、细胞分化程度为 PVTT形成的高危因素（ χ2=20.97、13.67、4.73、5.04，均P＜0.05）。肿瘤大小、脉管浸润、细胞分化程度与AFP有关系（ χ2=8.121、4.038，均P＜0.05）。多因素分析AFP、脉管浸润是PVTT发生的独立危险因素。结论：在 HCC患者中，高滴度血清AFP可成为HCC患者发生 PVTT的一项危险指标，对早期发现肝癌合并 PVTT具有临床指导意义。

摘要:目的：探讨自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）肝移植术后激素的应用特点。方法：以我院和四川大学华西医院2005年1月至2012年1月间实施的99例成人肝移植术后病例为研究对象，分为２组，AIH 36例为观察组，非AIH 63例为对照组。比较2组患者围手术期参数是否存在差异，移植术后为防治排斥反应，激素使用的差异。结果：为了防治排斥反应，保持肝脏及各器官功能稳定，AIH组使用激素比例明显大于非AIH组（P值为0.000），观察组激素使用量[（17.8±5.3） mg/d]及使用时间（385.2±21.7） d明显大于对照组[（9.4±3.9） mg/d，（47.1±11.3） d]（P值均为0.000）。结论：AIH肝移植术后抗排斥时重视激素的长期使用可以有效改善肝移植患者移植效果。

摘要:目的：探讨复方甘草酸苷（compound glycyrrhizin，GL）治疗儿童过敏性紫癜（Henoch-Schonlein purpura，HSP）的临床疗效，从Treg、Th17细胞及促炎因子方面探讨其免疫学机制。方法：27例初发HSP病人作为治疗组，26例作为疾病对照组，25例健康儿童作为正常对照组。治疗组在疾病对照组的基础上增加GL（0.5～2.0 ml/kg）静脉注射7 d治疗；留取治疗前后全血PBMC行流式检测Treg、Th17细胞阳性率，血浆ELISA法检测促炎因子TNF-α，干扰素诱导蛋白-10（interferon inducible protein-10，IP-10），白介素17（interleukin-17，IL-17），干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）浓度变化。结果：①临床症状：治疗组皮疹消退时间较疾病对照组有缩短趋势，肾损害有缓解，1月内紫癜复发率低；②Treg、Th17细胞比例：治疗组治疗前Treg细胞阳性率低于正常对照组（P=0.010）；治疗后与正常对照组无统计学差异（P=0.059）；疾病对照组治疗后Treg低于治疗前及正常对照组（P=0.006，P=0.013）。治疗组治疗前Th17细胞阳性率高于治疗后及正常对照组水平（P=0.024，P=0.013）；治疗后Th17与正常对照组无统计学差异（P=0.337）。疾病对照组治疗前Th17亦明显高于治疗后水平（P=0.014）。③炎症因子：2组HSP治疗前血浆IL-17，IFN-γ浓度均高于正常对照组水平（P=0.013，P=0.010）；治疗组治疗后与正常对照组无统计学差异（P=0.052，P=0.154），疾病对照组两指标治疗前后比较无统计学差异（P=0.218，P=0.970）。治疗组治疗前血浆TNF-α、IP-10均高于治疗后（P=0.011，P=0.037），疾病对照组治疗前后2指标无统计学差异（P=0.247，P=0.709）。结论：①GL治疗儿童HSP，可减轻肾损害、短期内减少紫癜复发。②HSP患儿急性期，具有促炎作用的Th17和抗炎作用的Treg可能共同参与了其免疫发病。③GL具有下调Th17、上调Treg细胞比例，降低血浆IL-17、IFN-γ、TNF-α、IP-10水平的作用，提示GL可能具有一定T细胞免疫调节功能，在佐治儿童HSP免疫炎症方面有一定疗效。

摘要:目的：确诊塑型性支气管炎病例1例，总结其临床特点与病原学诊断。方法：患儿，5+岁，临床表现为发热、咳嗽、喘息、气促、进行性呼吸困难，胸部CT示左肺大片实变，肺不张可能，予以纤维支气管镜（纤支镜）检查及灌洗，取出气道内内生性异物，确诊为塑型性支气管炎。取该患儿支气管肺泡灌洗液进行16种呼吸道病毒检测。结果：患儿支气管肺泡灌洗液进行16种呼吸道病毒检测，甲型流感病毒检出阳性，进一步扩增病毒核蛋白段测序明确为H3N2；同时显示人类博卡病毒（human bo－cavirus，HBoV）检出阳性，病毒拷贝数为3×105 拷贝/ml。该例患儿取出内生性异物后治愈出院。结论：作为儿科危重症，塑型性支气管炎通过纤支镜检查与灌洗取出内生性异物，不仅可以明确诊断，也是必不可少的、有效的治疗方法，本例患儿支气管肺泡灌洗液病原学诊断结果提示流感病毒与HBoV混合感染，值得临床关注。

摘要:

摘要:目的：探讨呼吸频率对兔心率变异（heart rate variability，HRV）频谱成分的影响和排除方法。方法：建立兔控制呼吸模型，用SKY-A4生理记录仪记录不同呼吸频率（40、50、60次/min）时心电、呼吸波形，使用HRV ＆ BRS2.0分析软件，分析呼吸频率对高频峰位置的影响，使用传统HRV（traditional heart rate variability，tHRV）和校正HRV（enhanced heart rate variability，eHRV）2种方法分析呼吸频率对HRV频谱成分的影响，比较不同方法分析结果。结果：（1）50次/min呼吸时呼吸峰在低频（low fre－quency，LF）与高频（high frequency，HF）交界处，减低呼吸频率（40次/min）呼吸峰左移至低频段，加快呼吸频率（60次/min）呼吸峰右移完全在高频段；（2）tHRV分析示：呼吸频率对总功率（total power，TP）无明显影响，对LF、LFnorm、HF、HFnorm影响具有显著性，两两比较，与基础呼吸频率50次/min相比，60次/min使HF增大（P=0.179），HFnorm增大（P=0.011），LF减小（P=0.04），LFnorm减小（P=0.001），LF/HF减小（P=0.028）；40次/min使HF、HFnorm减小，LF、LFnorm增大、LF/HF增大；（3）eHRV分析示：与呼吸频率50次/min相比，40次/min与60次/min呼吸时，LF、LFnorm、HF、HFnorm、LF/HF差异均无统计学差异。结论：呼吸频率减慢可使高频峰移至低频段致HF减小，LF增大，LF/HF增大的假象，用eHRV分析方法可排除此影响。

摘要:目的：验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）磷蛋白（P24蛋白质）以及探索其运用的条件。方法：选择出生24 h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液，对照组大鼠20只在相同部位注射磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS），未经注射的SD大鼠和C57小鼠各40只作为阴性实验对照，饲养到60 d取脑石蜡包埋制片；免疫组化染色用Envision两步法，一抗为多克隆或单克隆P24抗体，以PBS代替一抗作为空白对照，P24抗体的稀释浓度分别从1∶50、1∶100、1∶200、1∶400直到1∶5 000；以高倍镜下神经细胞细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，将每张切片阳性细胞比例评分乘以阳性强度评分计算总分。结果：多克隆P24和单克隆P24抗体分别在BDV感染大鼠实验组与阴性对照组的染色评分差异有统计学意义（多克隆抗体Z＝－3.108，P=0.000；单克隆抗体Z＝－4.605，P=0.000）；在多克隆P24抗体稀释度中，1∶200、1∶400的敏感性好而背景着色较轻，在单克隆P24抗体稀释度中，1∶100、1∶200、1∶400的敏感性好而无背景着色。结论：多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上能检测出BDV P24蛋白质；并且多克隆P24抗体推荐的浓度为1∶200和1∶400，单克隆P24抗体的推荐浓度为1∶100、1∶200和1∶400。

摘要:目的：优化尿液蛋白质制备方法以获得蛋白点数多且分辨率高的尿液双向凝胶电泳（two dimensional gel electrophore－sis，２-DE）图谱，为尿液蛋白质组学研究提供技术支撑。方法：首先，使用6种不同方法制备尿液蛋白质后比较蛋白质得率，并分析这些方法的２-DE谱蛋白点数及３次重复匹配率，进行统计分析计算P值；最后利用2种固相pH梯度（immobilized pH gra－dient，IPG）胶条和不同的聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）胶浓度进行2-DE分析，比较所得蛋白图谱的蛋白点数及分辨率。结果：与其他方法相比，超滤离心法制备尿液蛋白能获得更多的蛋白总量[（791±17） μg，P＝0.00０]，得到的电泳图谱蛋白点数也更多[（724±29）个，P＝0.00０]；利用pH 3~10 IPG胶条和12.5% PAGE分离有利于尿液蛋白质的整体分析，特别是酸性和碱性蛋白质点信息，而pH 4~7 IPG胶条能使等电点为4~7蛋白质的2-DE谱分辨率更高（P<0.05）。结论：建立了与2-DE兼容的尿液蛋白质制备方法，获得了更为全面的尿液蛋白点信息，为临床生理和疾病的尿液蛋白质组学研究奠定了基础。

摘要:目的：研究水黄花药材高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）指纹图谱及模式识别方法。方法：采用HPLC，以贵州不同产地、不同采收期的水黄花药材为对象，对15批药材进行指纹图谱研究，运用聚类分析对指纹图谱进行模式识别研究。结果：15批样品中有13个共有峰，15批药材相似度较高，色谱峰强度不同是药材的主要差别。通过聚类分析将15批样品按采收期不同分为2类。结论：该方法能很好分离水黄花的各类成分，HPLC指纹图谱具有良好的稳定性、重复性，可用于水黄花药材的质量控制。

摘要:目的：采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（high performance liquid chromatography-diode array detection，HPLC-DAD），建立同时测定延胡索药材中4种生物碱含量的方法，并比较不同产地中4种生物碱含量的差异。方法：采用 Agilent Eclipse XDB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色谱柱，以乙腈-0.05%磷酸（pH 6.0）为流动相进行梯度洗脱，流速 1.0 ml/min，检测波长分别为巴马亭、紫堇碱270 nm，延胡索乙素和四氢小檗碱 280 nm。结果：巴马亭在 1～10 μg/ml、紫堇碱在10～100 μg/ml、延胡索乙素在 5～30 μg/ml，四氢小檗碱在 1～10 μg/ml浓度范围内线性关系良好，高、中、低３种浓度平均加样回收率在 98.2%～101.3%之间。结论：本方法操作简单、稳定、重复性好，可用于同时测定延胡索中 4种生物碱的含量。

摘要:目的：建立兔血浆中水飞蓟宾生物黏附微球浓度的反相高效液相色谱测定方法，研究水飞蓟宾生物黏附微球的代谢动力学及相对生物利用度。方法：色谱柱，Agilent Zorbax C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相A，20 mmol/L KH2PO4缓冲溶液（pH 3.0）；流动相B，甲醇（A∶B=55∶45，V/V）。12只健康大白兔进行随机交叉实验，给药剂量为20 mg/kg。结果：生物黏附微球和混悬液的主要药动学参数：峰浓度Cmax分别为（905.94±230.16） ng/ml和（321.32±86.65） ng/ml；达峰时间T（peak）分别为（4.70±1.02） h和（1.66±1.00） h；半衰期t1/2分别为（4.07±0.12） h和（1.64±0.09） h；药物曲线下面积AUC0-24分别为（11 841.35±579.58） ng·h/ml和（1 537.34±156.43） ng·h/ml。由２种制剂的AUC0-24计算，生物黏附微球的相对生物利用度为（770.2±370.5）%。结论：水飞蓟宾生物黏附微球的生物利用度是速释制剂混悬液的7.7倍，明显提高了水飞蓟宾在体内的吸收。

摘要:目的：观察替比夫定治疗乙型肝炎肝硬化的临床疗效。方法：43例HBV DNA定量大于1×105拷贝/ml的乙型肝炎肝硬化患者入选此研究，23例予替比夫定600 mg/d；每3个月检测肝脏功能及HBV DNA的变化，同时与20例未抗病毒治疗病例进行比较。结果：随着治疗时间的延长，替比夫定治疗组患者各指标较治疗前及对照组均有明显的改善：HBV DNA在第4周降至4.83±0.70，天冬氨酸转氨酶、总胆红素和Child-pugh评分在第12周分别降至（55.19±22.48） U/L、（36.81±22.11） μmol/L、（6.65±1.94）分，丙氨酸转氨酶在第24周降至（63.67±19.52） U/L，差异均具有统计学意义（P<0.05），但白蛋白改善不明显，替比夫定组治疗２例病例于治疗的24周和36周出现病毒学突破，经检测为 rtM204I突变，给予阿德福韦酯联合治疗。结论：替比夫定在改善乙型肝炎肝硬化患者肝脏功能及降低 HBV DNA方面具有良好的临床疗效，但仍有较高的病毒耐药突变。

摘要:目的：探讨脓毒症患者入ICU时血浆血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）水平与患者病情严重程度及预后的关系。方法：将102例入选脓毒症患者分为脓毒症（n=30）、严重脓毒症（n=26）及脓毒性休克（n=46）3个亚组，按住院期间预后分为存活组及死亡组，以40例健康志愿者作为对照组。比较脓毒症患者入ICU时的血浆PAF水平、血清炎症标志物降钙素原（procalcitonin，PCT）浓度、急性生理和慢性健康评分（acute physiology and chronic health evaluationⅡ， APACHEⅡ）、简化急性生理评分Ⅱ（simplified acute physiology scoreⅡ，SAPSⅡ）以及序贯器官功能衰竭（sequential organ failure assessment，SOFA）评分，分析患者血浆PAF水平与血清PCT浓度、APACHEⅡ、SAPSⅡ及 SOFA评分的相关性。结果：脓毒症组、严重脓毒症组及脓毒性休克组患者血浆PAF水平较对照组均明显增高（z=-5.424、-5.512、-7.662，P均=0.000），脓毒性休克组患者血浆PAF水平明显高于脓毒症及严重脓毒症组（z=-4.559、-3.910，P均=0.000），而后２组患者血浆PAF水平差异无统计学意义（z=-0.427，P=0.669）；脓毒症患者血浆PAF水平与血清PCT浓度、SAPSⅡ及SOFA评分呈明显正相关（rs=0.376、0.326、0.483，P=0.000、0.001、0.000），但与APACHEⅡ评分相关性不明显（rs=0.143，P=0.152）；死亡组患者血浆PAF水平较存活组明显增高（z=-3.152，P=0.002），受试者工作特征（receiver operating characteristics，ROC）曲线分析显示，PAF及APACHEⅡ评分可作为脓毒症患者住院期间死亡的预测指标（曲线下面积分别为0.708、0.787）。结论：脓毒症患者入ICU时的血浆PAF水平与患者病情严重程度基本呈正相关，并且与患者预后相关，可用于指导评估脓毒症患者的病情及预后。

摘要:目的：对比分别以埃索美拉唑镁、奥美拉唑、兰索拉唑为基础的治疗方案对Barrett食管（Barrett’s esophagus，BE）的治疗效果。方法：选取87例患者，随机分为3组，分别以埃索美拉唑镁、奥美拉唑和兰索拉唑为基础进行治疗，对比患者在治疗前、治疗后1~5周以及治疗后12~24个月的长程维持治疗期内罹患BE的发展变化情况。结果：埃索美拉唑镁组幽门螺旋杆菌（helicobacter pylori，Hp）感染抑制情况和胃食管反流病（gastroesophageal reflux disease，GERD）症状缓解情况均优于奥美拉唑组和兰索拉唑组（P=0.019，P=0.007），差异有统计学意义。对BE的直接治疗作用方面，相对于奥美拉唑组和兰索拉唑组，埃索美拉唑镁组在治疗后化生长度缩减率（P=0.028 2）、化生面积减小率（P=0.022 6）、鳞状上皮检出率（P=0.001）、混杂上皮检出率（P=0.003）等评价指标上显示其疗效占优；对BE的预防作用方面，通过对比治疗后检出化生程度加剧的病例数（检出率）等指标，埃索美拉唑镁组与奥美拉唑组和兰索拉唑组相比差异无统计学意义（P=0.483）；不良反应发生的监测情况，埃索美拉唑镁组不良反应发生率低于奥美拉唑组和兰索拉唑组（P=0.013），显示其安全性较高。结论：基于埃索美拉唑镁的治疗方案更加安全、可靠，不良反应低，可以更好的控制Hp感染，抑制胃酸分泌，缓解、消除GERD对食管黏膜上皮的侵蚀，促进食管黏膜上皮细胞的增生，进而在一定程度上实现了对病变组织的修复，遏制了BE向食管腺癌的进一步发展。

摘要:目的：探讨血管内介入治疗在围手术期应用抗生素对术后感染的预防价值。方法：回顾性分析我院2007年1月至2013年3月收治的肝癌行肝动脉化疗栓塞术（transcatheter arterial chemoembolization，TACE）患者资料以及2011年1月至2013年3月收治的肝硬化行经颈静脉肝内门体分流术（transjugular intrahepatic portosystemic shunt，TIPS）患者资料。纳入TACE共计538例，包括男501例，女37例，年龄（52.87±12.33）岁，TIPS术共计61例，包括男47例，女14例，年龄（47.52±9.55）岁。根据TACE和TIPS围手术期是否预防性应用抗生素，将病例分为预防性使用抗生素组和未预防性使用抗生素组，比较2组术后感染率，并分析术后感染相关危险因素。结果：TACE术预防性使用抗生素组术后感染率为16.71%（60/359），未预防性使用抗生素组术后感染率为20.11%（36/179）（P=0.33）。单因素及多因素分析提示肝功能Child-Pugh分级、手术时间大于2 h为术后感染的独立影响因素。TIPS预防性使用抗生素组术后感染率为33.33%（5/15），未预防性使用抗生素组术后感染率为34.78%（16/46）（P=0.92）。多因素分析提示年龄、肝功能Child-Pugh分级为TIPS术后感染的独立影响因素。结论：肝功能Child-Pugh A级患者TACE及TIPS围手术期不必常规预防性使用抗生素，对于肝功能差、手术时间长、老年等高危感染因素患者，酌情选择适宜的抗生素更有临床预防价值。

摘要:目的：探讨吲哚菁绿（indocyanine green，ICG）排泄实验对门静脉高压症患者择期外科治疗的指导意义。方法：分析 47例肝硬化门静脉高压症患者行择期联合断流术的临床资料，根据患者术前ICG 15 min排泄率（indocyanine green clearance rate at 15 minute，ICGR15）水平将患者分为ICGR15≤10%（A组），10%< ICGR15≥30%（B组），ICGR15>30%（C组）3组。根据患者术后是否发生重度肝功能损害，将患者分为轻度肝功能受损组（M组），重度肝功能损害组（S组）。分析各组患者临床资料的差异。结果：A、B、C 3组患者术前Child-Pugh评分相当、术中出血量及手术时间相似，以上各组P >0.05；而术后最低血清白蛋白（al－bumin，ALB）水平（P=0.002）、术后最高总胆红素（total bilirubin，TBIL）水平（P=0.012）、术后肝功能恢复时间（P=0.002）及术后严重肝功能损害发生率（P=0.023）均存在统计学差异；M组与S组间仅术前ICGR15水平明显不同（P=0.027）。结论：对于择期联合断流术患者，患者术后肝功能不全主要与患者肝脏储备功能相关，而非手术麻醉打击；术前ICGR15较之Child-Pugh评分能更准确的反应患者肝功能储备，能够更准确的预测术后重度肝功能损害；恢复患者肝功能储备亦应是术前保肝治疗的目标之一。

摘要:目的：探讨正畸-正颌联合治疗在治疗复杂牙-牙槽骨骨性黏连中的临床应用。方法：根据患者实际临床表现，对2例复杂牙-牙槽骨骨性黏连患者，合理施以正畸-正颌联合治疗改良技术进行治疗。结果：2例患者均顺利完成治疗，面畸形得到了矫正，咀嚼功能得到改善，远期效果稳定，患者对治疗效果满意。结论：对于较复杂的牙-牙槽骨骨性黏连患者，需根据患者实际情况，合理运用正畸-正颌联合治疗的各种手术方式，为患者提供一个综合性的个性化的治疗方案；本研究中正畸-正颌联合治疗中改良的正颌手术方法如非常规的根尖下截骨术、“三明治法”植骨术具有较强的可操作性，无严重并发症，临床效果好，远期效果肯定，值得临床借鉴及推广。