摘要:胃肠道微生态稳态在维持正常的宿主生理活动中发挥着重要作用，幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是常见的胃内病原菌，感染后可引起胃黏膜损伤，甚至导致胃癌发生。Hp在胃内定植可影响胃肠道微生态稳态，胃肠道菌群也可参与Hp致病过程，影响Hp致病结局。本文就Hp感染与胃肠道微生态之间的相互作用及其对Hp致病的影响进行综述。进一步揭示Hp感染对胃肠道微生态的影响，胃肠微生态在Hp感染致病中的作用及益生菌对Hp根除治疗的意义。

摘要:目的：观察禹白附提取物对人胃癌细胞GC9811细胞增殖、迁移的影响，探讨其可能的作用机制。方法：采用植物化学技术对禹白附进行提取分离，再采用四甲基偶氮唑蓝比色法（tetramethyl azo thiazole blue colorimetric method，MTT）检测不同浓度禹白附提取物作用不同时间对GC9811细胞增殖的抑制作用；细胞划痕实验和Transwell小室法检测禹白附提取物对细胞迁移能力的影响；实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法（real-time quantitative polymerase chain reaction method，RT-qPCR）细胞基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）、E-钙黏蛋白（E-Cadherin）的表达水平。结果：MTT比色分析法检测结果表明，禹白附提取物对GC9811细胞的生长有明显抑制作用且浓度和作用时间呈正相关；细胞划痕实验和Transwell小室法结果显示，随禹白附提取物浓度的增加，GC9811细胞迁移能力下降；实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法结果表明，与禹白附提取物15 g/L组比较，禹白附提取物30 g/L组的MMP-2、MMP-9表达值均明显降低，而E-Cadherin表达明显上调。结论：禹白附提取物能够抑制胃癌细胞的增殖和转移，其机制可能与其抑制MMP-9和MMP-2上调E-Cadherin的表达有关。因此，禹白附提取物具有很强的抗肿瘤作用，为进一步寻找高效低毒的抗肿瘤先导化合物奠定了基础，值得进行深入研究。

摘要:目的：利用RNA高通量测序和生物信息学分析筛选出调控食管胃结合部腺癌（adenocarcinoma of esophagogastric junc－tion，AEG）增殖、侵袭能力的关键环状RNA分子，并对其作用方式进行初步探究。方法：提取22对食管胃结合部腺癌组织及癌旁正常黏膜组织的RNA。采用RNA高通量测序（测序深度200×），利用生物信息分析云平台进行差异基因筛选，同时对差异表达的基因构建共表达网络和circRNAs-miRNAs-mRNAs间的内源性RNA竞争机制（ceRNA）网络；利用RNA图谱共表达网络构建和内源性竞争RNA负相关分析，筛选出在AEG发生过程中可能发挥关键作用的circRNAs。并预测可与该circRNA存在ceRNA关系的miRNAs和mRNAs；通过qRT-PCR等方法对该circRNA在胃癌组织、癌旁组织中的表达进行验证。结果：通过RNA高通量测序，共预测得到46 553个circRNAs，对测序数据进行严格质控，得到26个差异表达的circRNAs（fold change≥2或fold change≤0.5，false discovery rate<0.05），其中10个circRNAs表达上调，16个circRNAs 表达下调。对组织样本进行mRNA和miRNA测序分析，构建circRNAs-miRNAs-mRNAs间的ceRNA网络、RNA图谱共表达网络和内源性竞争RNA负相关分析。结果表明，has_circ_0007766在AEG肿瘤组织中特异性高表达，可能在AEG发生发展过程中起关键作用；同时发现，miR4492与circRNA0007766和MET mRNA均有结合位点。结论：has_circ_0007766可能通过miR4492-circRNA0007766-MET mRNA的ceRNA网调控食管胃结合部腺癌增殖、侵袭，是AEG发生发展的关键circRNA。

摘要:目的：探讨长链非编码RNA MALAT1（long non-coding RNA MALAT1，lnc RNA MALAT1）调控miR-22/snail轴对胃癌增殖、迁移及侵袭的影响。方法：采用siRNA干扰技术抑制MALAT1表达，同时过表达miR-22和Snail；采用RT-PCR检测MALAT1，miR-22和snail在胃癌细胞系中的表达水平（n=3）；采用Western blot检测NC组、si-MALAT1组中snail蛋白的表达水平（n=3）；采用CCK-8法在12、24、48、72 h检测NC组、si-MALAT1组、miR-22组、miR-22+snail组、si-MALAT1+miR-22组中细胞吸光度值（n=3）；采用划痕实验检测NC组、si-MALAT1组、miR-22组迁移速度（n=3）；采用Transwell检测NC组、si-MALAT1组、miR-22组、miR-22+snail组、si-MALAT1+miR-22组穿过膜细胞的个数（n=3）；采用双荧光素酶检测NC+pMIR-MALAT1-WT组、NC+pMIR-MALAT1-MUT组、miR-22+pMIR-MALAT1-WT组、miR-22+pMIR- MALAT1-MUT、NC+ pMIR-Snail-WT组、NC+pMIR-Snail-MUT组、miR-22+pMIR-Snail-WT组、miR-22+pMIR-Snail-MUT组的荧光活性（n=3）。两独立样本间的比较采用t检验，多组数据之间的比较采用单因素方差进行分析，涉及时间因素时采用重复测量方差分析。结果：MALAT1在胃癌细胞系中的表达水平明显高于正常胃黏膜上皮细胞（均P=0.000）；低表达MALAT1后，AGS和SGC-7901增殖能力（P1=0.001，P2=0.005），迁移能力（P1=0.018，P2=0.007），侵袭能力（P1=0.024，P2=0.015）均降低；同时双荧光素酶结果显示MALAT1能够靶向结合miR-22（P=0.001），miR-22能够靶向结合snail（P=0.001）；miR-22在胃癌细胞中的表达水平明显低于正常胃黏膜上皮细胞（均P<0.05）；过表达miR-22后，AGS和SGC-7901增殖能力（P1=0.004，P2=0.009），迁移能力（P1=0.034，P2=0.005），侵袭能力（P1=0.037，P2=0.011）均降低；在低表达MALAT1和过表达miR-22后能够更进一步增加低表达MALAT1后对AGS和SGC-7901的增殖（P1=0.022，P2=0.006）和侵袭（P1=0.024，P2=0.015）的抑制作用；同时过表达miR-22和snail后能够反转miR-22对AGS和SGC-7901的增殖（P1=0.003，P2=0.004）和侵袭（P1=0.015，P2=0.01）的抑制作用。结论：MALAT1在胃癌细胞中明显高表达，并能通过调控miR-22/snail轴促进胃癌增殖、迁移及侵袭。

摘要:目的：研究食管鳞癌原代细胞对自然杀伤细胞表型及功能的调控。方法：收集新鲜食管鳞癌组织，采用改良组织块结合酶消化法在体外培养原代食管鳞癌细胞，通过裸鼠皮下成瘤模型及免疫组织化学技术鉴定食管鳞癌细胞；收集正常人外周血单个核细胞，磁珠法负性分离NK细胞；将原代食管鳞癌细胞培养上清与NK细胞共培养（根据共培养条件分组为NC-NK，ESCC1-NK，ESCC2-NK），使用流式细胞术检测NK细胞表面及胞内分子的表达；通过裸鼠皮下成瘤及肺转移模型研究原代食管鳞癌细胞对NK细胞肿瘤杀伤作用的影响。结果：与NC-NK组比较，ESCC1-NK组、ESCC2-NK组活化型受体NKG2D（56.84±1.28，41.89±2.17，29.40±1.32）（P=0.008，P=0.001）、NKP30（45.79±1.90，19.54±1.27，26.59±1.47）（P=0.001，P=0.003）及CD16（84.82±1.38，55.95±2.29，36.07±1.97）（P=0.001，P=0.000）表达降低；NK细胞胞内效应分子颗粒酶B（94.87±1.04，80.52±0.99，78.67±2.73）（P=0.013，P=0.008）及增殖相关抗原Ki67（70.15±2.35，52.31±1.74，50.02±2.68）（P=0.017，P=0.011）表达下降；活化型受体NKP44、NKP46、CD226，穿孔素及抑制型受体NKG2A、CD158b的表达差异无统计学意义。动物实验显示：皮下瘤体体积ESCC1-NK组和NC-NK组组间有差异（F=54.689，P=0.000）；ESCC1-NK处理组肺转移灶数（41.00±3.11）多于NC-NK处理组（25.25±2.32）（t=4.068，P=0.007）。结论：原代食管鳞癌细胞可能通过抑制NK细胞活化及增殖、下调NK细胞杀伤效应分子的表达来抑制NK细胞肿瘤杀伤效应，从而逃逸机体免疫监视。

摘要:目的：探索与HBV（hepatitis B virus，HBV）亚型相关的CD8+ T淋巴细胞抑制性基因多态性与病毒突变的相互作用对HBV感染结局的影响。方法：总共纳入239例健康对照（healthy controls，HC）者，429例自发清除（spontaneous clearance，SR）患者，858例慢性HBV感染（chronic HBV infection，CH）患者。从5个CD8+ T淋巴细胞抑制性基因中挑选出28个标签SNP（tagging SNP，tgSNP）进行基因分型。采用直接测序确定HBV病毒突变。结果：CD8+ T淋巴细胞抑制性基因多态性（CD244中的rs485618，rs4656942，rs3766377和BIM中的rs6746608）与HBV突变（T53C，A166C，T216C，A293G，A1762T，G1764A和A1762T / G1764A）的相互作用显著影响肝硬化（liver cirrhosis，LC）或肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）发生的风险。在多因素降维分析法（multifactor dimensionality reduction，MDR）分析中发现类似结果。结论：CD244和BIM的基因多态性可能参与调节肝硬化或肝细胞癌相关HBV突变的免疫选择，并且其相互作用可能影响慢性HBV感染进展。

摘要:目的：探讨人参皂苷（ginsenoside，Rg1）对高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）的改善作用及可能的机制。方法：将42只健康成年C57/BL雌性小鼠随机分为对照组、模型组、Rg1低剂量组、Rg1高剂量组、二甲双胍组，对照组和模型组每组各9只小鼠，其余小组每组各8只小鼠。对照组给予普通饲料喂养，其余各组给予高脂饲料喂养，持续喂养16周。16周后，对照组和模型组给予0.9％生理盐水20 mL/（kg·d）灌胃，Rg1低剂量组给予人参皂苷Rg1 20 mg/（kg·d）灌胃，Rg1高剂量组给予人参皂苷Rg1 40 mg/（kg·d）灌胃，二甲双胍组给予二甲双胍150 mg/（kg·d）灌胃。持续治疗4周后采集各组小鼠血清和肝脏组织。观察各组肝组织病理学形态，测定血清转氨酶及血脂水平、肝组织匀浆中丙二醇（malondi－aldehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）的含量及内质网应激（endoplas－mic reticulum stress，ERS）与炎症小体相关蛋白的表达情况。结果：Rg1低、高剂量组血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotrans－ferase，ALT）分别为（41.87±10.64）、（43.46±13.84） U/L，天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）分别为（159.56±21.29）、（159.56±25.01）U/L，甘油三酯（triglyceride，TG）分别为（0.69±0.15）、（0.75±0.12）U/L，均明显低于模型组（P=0.001，P=0.010，P=0.000），肝组织脂肪变性程度明显轻于模型组（P=0.000）。Rg1能降低FFA，MDA含量，提高SOD活力（均P=0.000）。Rg1能下调GRP78、CHOP、Caspase12、NLRP3、IL-1β蛋白的表达（P=0.000，P=0.003）。结论：Rg1可能通过提高抗氧化酶活性、抑制ERS相关分子及炎症小体活化来改善NAFLD。

摘要:目的：研究肝细胞中乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）复制对分化抑制因子（inhibitor of differentiation，Id）家族表达的影响。方法：利用qRT-PCR、Western blot检测分析Id家族在HBV瞬时或稳定复制的肝癌细胞中表达水平的变化，并在HBV复制质粒PCH9-HBV1.1转染的正常肝细胞和HBV转基因小鼠肝组织细胞模型中进一步验证。将乙型肝炎病毒S蛋白（hepatitis B virus S protein，HBs）、乙型肝炎病毒核心蛋白（hepatitis B virus core protein，HBc）、乙型肝炎病毒DNA聚合酶（hep－atitis B virus DNA polymerase，HBp）、乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein，HBx）的过表达质粒转染HepG2细胞，检测各组与载体对照组细胞中Id家族表达水平的变化，分析比较乙肝病毒编码的4种蛋白对Id家族的调控作用。利用荧光素酶报告基因检测病毒各组分蛋白对Id蛋白启动子活性的影响。结果：瞬时转染HBV表达质粒的HepG2细胞较对照组细胞，Id1、Id3的mRNA和蛋白表达水平均降低（mRNA：t=3.952、3.189，P=0.017、0.033；蛋白：t=10.532、4.155，P=0.000、0.014）；HepG2.2.15中Id1、Id3 mRNA和蛋白的表达水平较HepG2对照组均下降（mRNA：t=5.553、7.211，P=0.005、0.002；蛋白：t=4.193、3.849，P=0.014、0.018）；HepAD38（Tet-）中Id1、Id3蛋白的表达量较 HepAD38（Tet+）组均降低（t=3.052、3.712，P=0.038、0.021）。同时，HBV的复制可以抑制LO2细胞及小鼠肝组织中Id1、Id3的表达（mRNA：t=14.564、3.281、3.489、3.495，P=0.000、0.030、0.025、0.025；蛋白：t=5.651、5.336、4.948、5.149，P=0.005、0.006、0.008、0.007）。转染HBV病毒各编码蛋白质粒的HepG2细胞中，HBc组Id1、Id3较载体对照组的mRNA表达水平降低最明显（77.7%、76.2%，F=9.945、37.528，t=6.481、10.915，P=0.000、0.000），Western blot结果显示HBx组Id1、Id3蛋白表达量下降最明显（86.2%、68.4%，F=38.225、7.159，t=12.550、5.295，P=0.000、0.001）。双荧光素酶报告基因检测结果表明，HBc组Id1、Id3启动子活性较对照组降幅最大（62.2%、56.3%，F=16.530、5.210，t=5.442、3.222，P=0.000、0.019）。结论：乙型肝炎病毒可以抑制肝组织、细胞中Id1及Id3的表达，其中HBc对Id1、Id3 mRNA的下调最明显，HBx则对Id1、Id3 蛋白水平上的抑制作用最明显。

摘要:目的：构建人基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP-2）基因重组真核表达载体，探讨MMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法：以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型，以基因重组技术构建pEYFP-Mmp-2重组真核表达载体，pEYFP-Mmp-2一过性转染模型细胞过表达MMP-2-YFP，siRNA转染沉默模型细胞内源性MMP-2表达，设立空白对照、MMP-2沉默对照组、MMP-2沉默组、过表达MMP-2融合蛋白对照组、过表达MMP-2融合蛋白组，划痕实验检测细胞迁移能力，侵袭小室实验检测细胞侵袭能力，钙蛋白酶（calcium-activated neutral protease，Calpain）特异性抑制剂Calpeptin抑制Calpain活性，蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2-YFP、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vi－mentin）表达变化。结果：成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2。pEYFP-Mmp-2转染过表达MMP-2融合蛋白组细胞高表达MMP-2-YFP。与MMP-2沉默对照组相比，MMP-2沉默组内源性MMP-2表达明显下调（P=0.000），细胞12 h、24 h及48 h迁移率明显降低（P=0.000或P=0.001），48 h侵袭率明显降低（P=0.004），E-cadherin表达明显上调，N-cadherin及Vimentin表达明显下调（P=0.000）。与过表达MMP-2融合蛋白对照组相比，过表达MMP-2融合蛋白组12 h、24 h及48 h迁移率明显增强（P=0.015或P=0.001），48 h侵袭率明显升高（P=0.011），细胞E-cadherin表达明显下调，N-cadherin及Vimentin表达明显上调（P=0.003或P=0.001）。Calpeptin预处理明显降低过表达MMP-2融合蛋白组细胞迁移率和侵袭率（P=0.000），上调E-cadherin，下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平（P=0.000）。结论：本实验通过基因重组技术成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2，成功表达MMP-2-YFP 融合蛋白；并发现MMP-2通过调节Calpain介导肝癌SMMC-7721细胞迁移、侵袭及EMT。

摘要:目的：通过数据挖掘分析肝细胞癌中KIF2C基因的表达并探讨其临床意义。方法：使用Oncomine和GEPIA数据库分析KIF2C在肝细胞癌组织中的表达情况；通过GEPIA数据库进行KIF2C的表达程度与病理分级及肝细胞癌生存期的相关性分析；最后利用STRING数据库分析与KIF2C相互作用的蛋白。结果：通过Oncomine和GEPIA数据库分析显示，在mRNA水平上，KIF2C在肝细胞癌中显著高表达（P=0.000），表达水平与其预后为负相关（P=0.000），且肝癌病理分级越高，KIF2C表达水平越高。通过STRING数据库分析显示与KIF2C相关的蛋白有PLK1、AURKB、CENPA等。结论：通过对肿瘤基因数据库进行挖掘发现，KIF2C在肝细胞癌组织中明显高表达且与患者预后相关，为肝细胞癌的致病机制研究和抗肿瘤靶向治疗提供了理论支持。

摘要:目的：探讨实时剪切波弹性成像（real-time shear wave elastography，SWE）在非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）患者诊断与分期中的应用价值。方法：分别对135例（能够经肝脏穿刺活检或获得肝脏标本证实的）NAFLD患者术前行实时剪切波弹性成像，获得肝脏杨氏模量平均值（Mean），对Mean与病理NAFLD分期进行相关性分析，比较各期NAFLD患者Mean的组间差异，采用ROC曲线评价Mean预测NAFLD的效能。结果：NAFLD不同病理分级间Mean的差异具有统计学意义，随着NAFLD病理级别的增加而增加（P<0.05）；Mean与NAFLD分期呈正相关（rs=0.916，P<0.05）。Mean预测非酒精性脂肪性肝炎曲线下面积为0.971（95%CI=0.949～0.994），敏感度91.3%，特异度97.0%，截点为7.30 kPa。Mean预测非酒精性脂肪性肝纤维化曲线下面积为0.984（95%CI=0.969～0.999），敏感度98.6%，特异度88.7%，截点为9.05 kPa。Mean预测非酒精性脂肪性肝硬化曲线下面积为0.965（95%CI=0.940～0.990），敏感度90.0%，特异度88.5%，截点为11.35 kPa。结论：肝脏实时剪切波弹性成像的Mean可反映NAFLD的严重程度，是NAFLD分期较为敏感的方法，有利于指导临床诊断与治疗。

摘要:目的：检测结直肠癌（colorectal cancer，CRC）患者外周血中髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）含量及血清S100A9蛋白的水平，分析两者之间的相关性，探讨其在临床诊疗中的潜在应用价值。方法：收集82例临床外周血样本及相关电子病例，其中CRC患者52例，健康者30例。采用流式检测外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中MDSCs的频数，双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清S100A9水平，用SPSS及Graphpad Prism 进行Mann-Whitney 检验分析，Spearmanr分析和ROC曲线分析。结果：CRC患者外周血MDSCs以及血清S100A9水平均明显高于健康对照组（P＜0.01），且血清S100A9蛋白水平和外周血中MDSCs的频数两者之间存在正相关（r=0.38，P=0.01）；同时相比于Dukes分期中的A/B期和未发生转移的患者，处于C/D期和伴淋巴结转移2组患者血清中的S100A9水平及MDSCs频数明显升高，并具有统计学意义（P＜0.01）；并且两者的ROC曲线下面积AUC＞0.7（P<0.01），说明两者对诊断CRC以及评估CRC患者分期情况和是否发生转移均具有较好的诊断价值。结论：CRC患者外周血PBMC中MDSCs的频数与血清S100A9蛋白均明显升高；两者均有望成为CRC分期和淋巴结转移的标志物。

摘要:目的：探讨18F-脱氧葡萄糖（18F-fluorodeoxyglucose，18F-FDG）正电子发射型计算机断层显像（positron emission computed tomography，PET/CT）联合常见血清胰腺肿瘤标志物在诊断早期可切除胰腺癌术后复发转移中的价值及相关性。方法：回顾性分析53例早期可切除胰腺癌患者术后怀疑复发转移而行PET/CT和胰腺肿瘤标志物检测的相关检查资料，探究两者联合检查用于诊断早期可切除胰腺癌术后复发转移的价值及相关性。结果：联合组[PET/CT+糖类抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）+糖类抗原242（carbohydrate antigen 242，CA242）+糖类抗原50（carbohydrate antigen 50，CA50）]在诊断早期可切除胰腺癌术后复发转移的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值（positive predictive value，PPV）及阴性预测值（negative predictive value，NPV）分别为 97.83%、85.71%、96.23%、97.83%、85.71%。其中联合组灵敏度分别高于单独CA19-9组、单独CA242组、单独CA50组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。联合组准确率分别高于单独PET/CT组、单独CA19-9组、单独CA242组、单独CA50组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。血清CA19-9水平与PET/CT中病灶的最大标准化摄取值（maximum standardized uptake value，SUVmax）呈正相关（r=0.583，P=0.018）。结论：18F-FDG PET/CT检查联合常见胰腺肿瘤标志物检测在诊断早期可切除胰腺癌术后复发转移中具有较高的灵敏度、准确率及阳性预测值，能尽早诊断胰腺癌术后出现的复发转移，使患者及时得到进一步治疗。

摘要:目的：探讨肝移植供体血钠、供受体血钠差值对肝移植患者术后的影响。方法：回顾性分析2016年7月至2018年5月我院行供体器官维护并行肝移植术的供体及肝移植患者分别20例，记录临床资料进行分析。结果：①供体最高血钠Na>155 mmol/L与Na<155 mmol/L两组肝移植患者术后最高总胆红素、最高丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase，ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase，AST）、肝功能恢复时间、重症监护病房（intensive care unit，ICU）住院时间、总住院时间差异无统计学意义。②供体移植时血钠分为Na>155 mmol/L与Na<155 mmol/L 2组，其中Na<155 mmol/L组术后最高ALT更高[（747.17±375.34） U/L vs. （357.00±190.50） U/L，t=-2.700，P=0.015]。③供受体血钠差值ΔNa<10 mmol/L、ΔNa=10~20 mmol/L、ΔNa>20 mmol/L 3组肝移植患者术后最高ALT有差异[（805.00±332.90） U/L、（329.75±237.43） U/L、（329.60±186.21） U/L，F=6.714，P=0.007]；两两分析示ΔNa<10 mmol/L组肝移植术后最高ALT比其他2组更高（P=0.012，P=0.007），ΔNa=10~20 mmol/L与ΔNa >20 mmol/L组无统计学差异（P=0.999）。④供受体血钠差值ΔNa与肝移植患者术后最高ALT两者存在线性负相关（相关系数R=-0.579，P=0.007），ΔNa越小，术后最高ALT越大。⑤回归分析示肝移植患者术前终末期肝病模型评分（model for end-stage liver disease，MELD）是移植术后感染并发症发生独立危险因素。结论：供体移植时血钠低于155 mmol/L肝移植患者术后最高ALT更高；供受体血钠差值ΔNa越小，术后最高ALT更高；MELD评分是肝移植患者术后感染并发症的独立危险因素。

摘要:目的：建立高效的EV71病毒反向遗传学系统，快速获得拯救病毒并鉴定其活性。方法：首先构建含有人RNA聚合酶Ⅰ启动子（Ppol Ⅰ）、ccdB自杀基因和鼠终止子（mTer）的接收质粒pHM-ccdB，并在ccdB两侧引入AarⅠ酶切位点；为了回避EV71病毒基因组中自身的AarⅠ酶切位点，分两段PCR扩增基因组，在引物中引入必需的AarⅠ酶切位点，通过Golden Gate Clone技术连接到目的载体中获得病毒拯救质粒pHT-EV71，转染至RD细胞后，获得拯救的EV71病毒，并以RT-PCR、病毒滴度、Western blot以及电镜检测等方法鉴定拯救子代病毒。结果：通过引入ccdB致死基因和Golden Gate Clone成功构建了EV71病毒的拯救质粒（pHT-EV71），并将其转染至RD细胞后，观察到明显的致细胞病变效应（cytopathic effect，CPE），将得到的拯救子代病毒，经EV71 VP1的特异性引物进行RT-PCR扩增，观察到长约1 900 bp的特异性条带；Western blot结果显示，该病毒可与EV71 VP1特异抗体结合；透射电子显微镜（transmission electron microscopy，TEM）检测可见20～30 nm球形病毒颗粒；在RD细胞中将子代病毒连续增殖8代后，检测其毒力高于母本株（6.35 lgTCID50/mL）。结论：通过引入ccdB和Golden Gate Clone技术，建立了快速、高效构建EV71病毒的拯救质粒的方法，效率达到100%，为正链RNA病毒反向遗传学系统的构建提供了一种新的策略，为进一步研究EV71病毒的致病机制及疫苗制备等提供了技术平台。

摘要:目的：为了探寻肝脏激酶B1（liver kinase B1，LKB1）的上游调控分子，并研究其对LKB1的影响。方法：首先，利用UbiBrowser数据库预测LKB1可能的上游调控分子，并根据评分筛选出可能对LKB1具有调控作用的Smurf1基因。然后，构建Smurf1和LKB1相关过表达质粒，并转染HEK293T细胞，通过Western blot检测LKB1蛋白质表达的变化。最后，运用荧光定量PCR（qPCR）、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）探索Smurf1调控LKB1可能的分子机制。结果：①成功构建LKB1和Smurf1相关过表达质粒。②在HEK293T细胞中过表达0、0.5、1、2 μg的野生型Smurf1时其对应的LKB1蛋白相对表达量分别为0.026 2±0.000 7、0.072 7±0.000 3、0.130 1±0.001 3、0.431 5±0.001 0。经单因素方差分析，其结果为F=79 636.433，P=0.000。与0 μg对照组相比，进一步采用LSD-t法分析，0.5、1、2 μg各组P值分别为0.000、0.000和0.000。③在HEK293T细胞中过表达0、0.5、1、2 μg的突变型Smurf1时其对应的LKB1的蛋白相对表达量分别为0.018 0±0.000 1、0.053 0±0.000 4、0.125 0±0.001 0、0.200 4±0.001 7。经单因素方差分析，其结果为F=12 887.993，P=0.000。与0 μg对照组相比，进一步采用LSD-t法分析，0.5、1、2 μg各组P值分别为0.000、0.000和0.000。④以GAPDH为内参，未过表达Smurf1组和过表达Smurf1组中，LKB1的相对mRNA表达水平分别为1.085 1±0.412 5、2.398 2±1.766 9。经独立样本t检验统计分析，P=0.257。⑤以β-actin为内参，未经Smurf1处理组、野生型Smurf1（WT） 处理组、突变型Smurf1（C699A） 处理组中LKB1的相对泛素化水平分别为1.823 8±0.027 8、0.088 1±0.005 1、0.212 7±0.006 2。经单因素方差分析，其结果为F=6 721.953，P=0.000。与未经Smurf1处理组相比，进一步采用LSD-t法分析，野生型Smurf1组和突变型Smurf1组各组P值分别为0.000和0.000。结论：这些结果表明Smurf1通过降低LKB1的多聚泛素化从而参与其蛋白稳定性的调节。

摘要:目的：探讨在聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）诱导的小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）模型中CD146的表达及意义。方法：将60只8周龄雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法，将小鼠随机分为第5、10和15天组，每组各20只。设定每组小鼠左眼为正常对照眼，右眼为实验眼，采用在视网膜下注射PEG诱导形成脉络膜新生血管模型。造模后摘取各组小鼠眼球，制作视网膜组织切片及HE染色，鉴定CNV模型。通过比较各组视网膜HE染色切片外核层（outer nuclear layer，ONL）厚度，观察PEG的视网膜毒性作用。采用实时荧光定量PCR法检测小鼠神经视网膜和RPE/脉络膜复合体中CD146、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）的mRNA水平变化。免疫组化染色法检测小鼠眼内CD146、VEGF和VEGFR2的表达。结果：HE染色和ONL层厚度比较均证实，视网膜下注射PEG造模成功且模型可靠，视网膜下注射后第5和10天均有CNV形成。实验组小鼠神经视网膜和脉络膜中CD146、VEGF、VEGFR2的mRNA表达水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义（F=30.412，P=0.000；F=84.974，P=0.000；F=117.423，P=0.000；F=918.786，P=0.000；F=319.110，P=0.000；F=113.896，P=0.000）。Person相关性分析提示在视网膜下注射PEG后，小鼠RPE/脉络膜复合体中CD146与VEGF和VEGFR2的表达量呈正相关（r=0.940，P=0.000；r=0.940，P=0.000；r=0.769，P=0.045；r=0.910，P=0.003；r=0.910，P=0.003；r=0.777，P=0.042）。免疫组化染色的结果显示，在造模第10天后，造模组与正常对照组相比较CD146、VEGFR2在神经节细胞层、内核层、外从状层、外核层的阳性表达均有不同程度增强（P=0.000，P=0.000，P=0.000）。结论：CD146伴随着CNV的形成表达上调，且与VEGF的表达量和VEGFR2的表达量呈正相关性，由此推断CD146可能在CNV形成的病理过程中起到至关重要的作用。

摘要:目的：探讨颗粒蛋白前体（progranulin，PGRN）缺陷型小鼠与野生（wild type，WT）型小鼠在咪喹莫特（Imiquimod，IMQ）诱导皮肤炎症模型中炎症及自噬的差异性。方法：运用IMQ涂抹WT（44只）和PGRN-/-（16只）小鼠背部皮肤构建银屑样皮肤炎症模型，并通过蛋白质印迹（Western blot）、定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）、苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色等方法检测小鼠组织结构、炎性因子[白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-10（in－terleukin-10，IL-10）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、一氧化氮合酶2（nitric oxide synthase 2，NOS2）、环氧化酶2（cyclo-oxygen-ase 2，COX2）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）]、凋亡相关蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（cys－teinyl aspartate specific proteinase 3，Caspase 3）]以及自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）、泛素结合蛋白（ubiquitin binding protein，P62）、自噬相关蛋白5（autophagy related protein 5，ATG5）、自噬相关蛋白7（autophagy related protein 7，ATG7）、自噬相关蛋白5和12的复合物（complex of autophagy related protein 5 and 12，ATG5-ATG12）]的变化。结果：成功建立了小鼠皮肤炎症模型，在WT小鼠模型中观察到上皮组织明显增厚，炎性细胞浸润增多，血管生成增加，炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α、NOS2、COX2在第6天表达最高（P<0.05），自噬随着时间的增加而增加；此外，第6天脾脏比重明显增加（P<0.05），炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α、NOS2、COX2、IL-1β表达最高（P<0.05）。与WT模型小鼠相比，PGRN-/-模型小鼠背部皮肤加厚更加明显，炎性因子IL-6、NOS2表达更高（P<0.05），组织自噬与凋亡水平明显降低（P<0.05）。结论：WT小鼠和PGRN-/-小鼠都能够在第6天成功建立小鼠皮肤炎症模型；与WT小鼠皮肤炎症模型相比，PGRN-/-小鼠加重了皮肤炎症模型症状，这一过程可能与PGRN缺陷阻碍了自噬的产生有关。

摘要:目的：探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）/c-Met轴介导内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）移植入低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary artery hypertension，HPAH）大鼠对大鼠的肺动脉压力和肺血管重构的影响。方法：构建HPAH模型大鼠；大鼠骨髓原代EPCs提取、培养和鉴定；构建c-Met腺病毒并转染EPCs；将大鼠分为c-Met-EPCs细胞组、EPCs细胞组、肺动脉高压组和正常组，每组10只。前2组大鼠通过尾静脉分别输注c-Met-EPCs细胞和EPCs细胞，后2组大鼠输注生理盐水；饲养一周后检测平均肺动脉压力（mean pulmonary arterial pressure，mPAP）和右心室肥大指数（right ventricle hypertrophy index，RVHI）；透射电镜检测肺动脉超微结构改变，肺组织病理切片观察肺小动脉改变；ELISA法测定血清内皮素-1（endothelin-1，ET-1）含量，Griess法测定血清一氧化氮（nitric oxide，NO）含量。结果：c-Met-EPCs细胞组、EPCs细胞组、肺动脉高压组和正常组4组大鼠的mPAP值分别为（23.17±3.07）、（30.85±3.15）、（33.55±5.47）、（20.30±1.99） mmHg；RVHI值分别为（32.48±2.38）%、（37.54±4.42）%、（38.53±2.81）%、（26.05±3.05）%；血清ET-1值分别为（69.45±6.32）、（95.76±7.31）、（99.14±8.39）、（62.35±6.06） ng/L；血清NO值分别为（99.63±11.40）、（56.07±3.32）、（48.83±6.56）、（125.50±12.26） μmol/L。EPCs细胞组、肺动脉高压组大鼠的mPAP、RVHI和血清ET-1含量明显高于正常组（P<0.05）；c-Met-EPCs细胞组较EPCs细胞组、肺动脉高压组明显降低（P<0.05）。EPCs细胞组、肺动脉高压组大鼠的血清NO含量明显低于正常组（P<0.05）；c-Met-EPCs细胞组较EPCs细胞组、肺动脉高压组明显升高（P<0.05）。透射电镜显示EPCs细胞组、肺动脉高压组肺动脉中膜平滑肌细胞线粒体和内质网肿胀、内皮细胞中断不连续，而c-Met-EPCs细胞肺动脉中膜平滑肌细胞线粒体和内质网肿胀不显著。肺组织病理切片显示EPCs细胞组、肺动脉高压组肺血管重构明显，而c-Met-EPCs细胞组肺血管重构减轻。结论：HGF/c-Met轴介导内皮祖细胞移植入低氧性肺动脉高压大鼠后可明显降低肺动脉压力和和改善肺血管重构，其机制可能与抑制ET-1释放和促进NO产生有关。

摘要:目的：探讨应用数字图像分析技术研究死后角膜褶皱时序性变化规律并筛选合适量化指标。方法：兔缢死后随机分为睁眼组和闭眼组，每组20只，置于20 ℃暗室内。于死后72 h内每隔1 h，使用数码相机采集兔角膜图像，应用MATLAB软件分割出角膜瞳孔区域图像，并提取反映死后角膜皱褶变化的4项图像纹理特征参数值（CON、COR、ASM、HOM）。比较死后睁、闭眼对各参数值随死后经过时间（postmortem interval，PMI）的变化趋势影响，分析各特征参数（y）与PMI（x）的相关性。结果：不论死后睁眼或闭眼，CON随PMI呈上升趋势，COR呈下降趋势，但睁眼组CON、COR值较闭眼组变化迅速且幅度大；CON、COR值与PMI相关性较好（P<0.05），回归方程分别为y=0.002 4x2-0.026 8x+0.467 3（R2=0.978，睁眼组）、y=0.000 4x2-0.010 6x+0.304 4（R2=0.904，闭眼组），y=-0.000 4x2+0.014 2x+3.893 8（R2=0.938，睁眼组）、y=-3E-05x2+0.001 2x+3.980 8（R2=0.852，闭眼组）；ASM、HOM值与PMI关系无统计学意义（P>0.05）。结论：个体死后角膜褶皱发生时序性变化，纹理特征CON、COR与死后经过时间相关性较好。

摘要:目的：探讨重组人Elafin对慢性高氧致新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）中炎性因子和核因子-κB p65（nuclear factor-κB，NF-κB）蛋白的影响。方法：将30只C57BL/6J新生24 h内小鼠随机分成空气组、高氧+L/R组及高氧+Elafin组（n=10）。高氧+L/R 组、高氧+Elafin组暴露于85%氧气中。21 d时进行基础肺功能测定，采用HE染色观察小鼠肺组织形态学改变，RT-PCR检测肺组织炎症因子的表达，Western blot检测NF-κB p65蛋白表达情况。结果：与空气组[（7.85±0.24） g]比较，高氧+L/R组小鼠体质量[（5.33±0.63） g]显著下降（P=0.000），肺发育受阻；TNF-α mRNA、IL-1β mRNA （P=0.000） 和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达增加，抗炎因子IL-4、IL-13 mRNA（P=0.000）表达降低。与高氧+L/R组比较，高氧+Elafin组小鼠体质量升高（P=0.014），肺泡形态趋于正常；TNF-α（P=0.011）、IL-1β（P=0.000） mRNA和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达降低，IL-4（P=0.047）、IL-13（P=0.000） mRNA表达增加。结论：Elafin能有效减轻高氧诱导的小鼠肺损伤，其作用机制可能与抑制NF-κB活化及炎症因子释放密切相关。

摘要:目的：探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂因子B3基因（serine protease inhibitor，SerpinB3）与前列腺癌的相关性。方法：运用Western blot方法检测SerpinB3蛋白在29例前列腺癌组织和35例正常对照前列腺增生组织中的表达差异；免疫组织化学方法检测SerpinB3蛋白在48例各期前列腺癌组织，33例良性对照组织芯片中的表达差异。应用脂质体法将合成的SerpinB3小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）瞬转前列腺癌DU145及PC3细胞；分为SerpinB3-siRNA1、SerpinB3-siRNA2和SerpinB3-siRNA3，随机干扰SerpinB3-siRNA-NC为阴性对照，未转染为空白对照组。选择干扰最佳的实验组行后续细胞迁移实验；判断干扰SerpinB3基因表达后对前列腺癌DU145及PC3细胞侵袭能力的影响。结果：Western blot证实SerpinB3蛋白在前列腺癌组织中的表达均高于对应的良性组织（P<0.001）；免疫组化检测发现SerpinB3蛋白在前列腺癌和良性组织中染色强度差异明显（P<0.001）；SerpinB3蛋白表达情况和患者年龄、肿瘤是否转移间无统计学差异（P=0.268，P=0.178）；和肿瘤病理及临床分期组间差异明显（P=0.031，P=0.042）。SerpinB3-siRNA能明显抑制肿瘤细胞迁移。结论：SerpinB3蛋白的明显上调表达能增强前列腺癌细胞侵袭能力。